Diferencia entre revisiones de «Histología/Microscopía»
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El microscopio electrónico de transmisión (TEM) fue el primer tipo de microscopio electrónico desarrollado. Utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra consiguiendo aumentos de 100.000X. Fue desarrollado por Max Knoll y Ernst Ruska en Alemania en 1931. Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrónico de barrido.
[[File:Microscope1751.jpg|Microscopio compuesto fabricado hacia 1751 por Magny. Proviene del laboratorio del duque de Chaulnes y pertenece al Museo de Artes y Oficios, París.|400px|thumb]]
Cronología del desarrollo del microscopio:
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El tipo de microscopio más utilizado es el microscopio óptico, que se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio óptico más simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general, se utilizan microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios ópticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces. El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo está compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto examinado. Las lentes de los microscopios están dispuestas de forma que el objetivo se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a través del ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real, el aumento total del microscopio depende de las distancias focales de los dos sistemas de lentes (Figura 4).
[[File:Microscope_diag-es.svg|Diagrama simple de la óptica de un microscopio.|400px|thumb]]
El microscopio óptico tiene un límite resolución (que es la menor distancia que debe existir entre dos objetos para que puedan visualizarse por separado) de cerca de 200 nm (0.2 µm ), en tanto que el microscopio electrónico puede incrementarlo en aproximadamente 1000 veces (Figura 5).
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El equipamiento adicional de un microscopio consta de un armazón con un soporte para el material examinado y de un mecanismo que permite acercar y alejar el tubo para enfocar la muestra. Los especímenes o muestras que se examinan con un microscopio son transparentes y se observan con una luz que los atraviesa; se suelen colocar sobre un rectángulo fino de vidrio. El soporte tiene un orificio por el que pasa la luz. Bajo el soporte se encuentra un espejo que refleja la luz para que atraviese el espécimen. El microscopio puede contar con una fuente de luz eléctrica que dirige la luz a través de la muestra (Figura 6).
[[File:Microscope-letters.svg|Microscopio óptico. Descripción: A) ocular, B) objetivo, C) portador del objeto, D) lentes de la iluminación, E) sujeción del objeto, F) espejo de la iluminación.|400px|thumb]]
==MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE==
El microscopio de contraste de fases fue creado por Frits Zernike en 1932. Este microscopio permite observar células sin colorear y resulta especialmente útil para células vivas. Este aprovecha las pequeñas diferencias de los índices de refracción en las distintas partes de una célula y en distintas partes de una muestra de tejido. La luz que pasa por regiones de mayor índice de refracción experimenta una deflexión y queda fuera de fase con respecto al haz principal de ondas de luz que pasaron la muestra. Aparea otras longitudes de onda fuera de fase por medio de una serie de anillos ópticos del objetivo y del condensador, anula la amplitud de la porción fuera de fase inicial del haz de luz y produce un contraste útil sobre la imagen (Figura 7). Las partes oscuras de la imagen corresponden a las porciones densas del espécimen; las partes claras de la imagen corresponden a porciones menos densas. Por lo tanto estos microscopios se utilizan para observar células vivas, tejidos vivos y cortes semifinos no coloreados.
[[File:Phase-contrast_microscope.jpg|Construcción simplificada de un microscopio de contraste de fase. Las diferencias de fase entre la luz que pasa a través del objeto y el fondo se producen al pasar los rayos a través de las diferentes partes de una placa de fase. Los rayos de luz se superponen en el plano de la imagen, la producción de contraste es debido a su interferencia.|400px|thumb]]
==MICROSCOPIO CONFOCAL==
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La propiedad fundamental y distintiva de la imagen confocal es que solo lo que está enfocado es detectado. Las áreas de la muestra fuera de foco aparecen negras, y no contribuyen a la formación de la imagen. Puesto que solo se ilumina un punto cada vez en el microscopio confocal, se requiere una exploración (scanning) sobre un raster regular en el espécimen para obtener imágenes bi o tridimensionales. La delgadez del plano focal se define mayormente como el cuadrado de la apertura numérica de la lente del objetivo y también por las propiedades ópticas del espécimen y el índice de refracción del ambiente.
[[File:Confocalprinciple_in_English.svg|Principios en los que se basa la microscopía confocal|400px|thumb]]
==MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA==
En el microscopio de fluorescencia los objetos son iluminados por rayos de una determinada longitud de onda (Figura 9). La imagen observada es el resultado de la radiación electromagnética emitida por las moléculas que han absorbido la excitación primaria y reemitido una luz con mayor longitud de onda. Para dejar pasar solo la emisión secundaria deseada, se deben colocar filtros apropiados debajo del condensador y encima del objetivo (Figura 10). Se usa para detectar sustancias con autofluorescencia (vitamina A) o sustancias marcadas con fluorocromos.
[[File:Fluorescence_microscop.jpg|Microscopio de Fluorescencia|400px|thumb]]
[[File:FluorescenceFilters_2008-09-28.svg|Estructura de un microscopio de fluorescencia|400px|thumb]]
==MICROSCOPIO ELECTRÓNICO==
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En el microscopio electrónico de barrido (MEB) la muestra es recubierta con una capa de metal delgado, y es barrida con electrones enviados desde un cañón. Un detector mide la cantidad de electrones enviados que arroja la intensidad de la zona de muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres dimensiones, proyectados en una imagen de TV. Su resolución está entre 3 y 20 nm, dependiendo del microscopio. Permite obtener imágenes de gran resolución en materiales pétreos, metálicos y orgánicos. La luz se sustituye por un haz de electrones, las lentes por electroimanes y las muestras se hacen conductoras metalizando su superficie.
[[File:ScanningMicroscopeJLM.jpg|Microscopio electrónico de Barrido|400px|thumb]]
[[File:Simens_numeri.jpg|Microscopio electrónico de Transmisión|400px|thumb]]
En la Figura 12 se muestra una comparación de la formación de la imagen en un microscopio de transmisión óptica, un microscopio electrónico de transmisión (TEM) y un microscopio electrónico de barrido.
[[File:SimpleSEMandTEM.jpg|Comparación de la formación de la imagen en un microscopio de transmisión óptica, un microscopio electrónico de transmisión (TEM), un microscopio electrónico de barrido (SEM) y un tubo de rayos catódicos (CRT) de pantalla de TV.|400px|thumb]]
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